Bei einem positiven PCR-Test …
… mit mehr als 24 Replikationszyklen besteht keine Ansteckungsgefahr mehr – trotzdem verwendet man heute die Ergebnisse von Messungen mit 30 Zyklen und mehr.
MehrDen offiziellen Zahlen des BAG oder RKI nach steigt die Zahl der Covid 19-Neuinfektionen rasant an — womit wiederum politisch argumentiert wird, wenn es um die Einführung eines neuen Lockdowns geht. Doch eine bereits im Mai 2020 publizierte Studie im renommierten Fachjournal Clinical Infectious Diseases macht klar: Die heute verwendeten Daten sind rein manipulativ. Denn sie basieren auf einem Wert, bei dem es eine Infektiosität in Wirklichkeit gar nicht gibt. Das wiederum erklärt auch die Tatsache, warum weder die Zahl der Todesfälle noch jene der Krankenhausaufenthalte ansteigt.
Ct-Wert als ausschlaggebende Grösse
Dabei geht es um den sogenannten Cyclus Treshold-Wert, der unter dem Kürzel Ct-Wert bekannt ist. Dieser Wert beschreibt, wie oft das SARS-CoV-2-Genfragment aus der Patientenprobe vervielfältigt werden muss, bevor ein zugesetzter fluoreszierender Farbstoff in Verbindung mit dem Erreger-Genfragment signifikant leuchtet.
Mit dem Leuchten kann nachgewiesen werden, dass überhaupt ein Teilstück des Virus in der Probe vorhanden ist. Es sagt auch aus, wie viele Virus-Fragmente in der Ausgangsprobe enthalten sind. Wenn nur ein Virus-Fragment enthalten ist, muss dieses Teilstück viele Male vervielfältigt werden, um einen Nachweis führen zu können. Hierbei entsteht ein großer Ct-Wert. Sind viele Virus-Fragmente in der Probe enthalten, sind nur wenige Vervielfältigungen nötig; der Ct-Wert ist klein. Deshalb gilt: Je je kleiner der Ct-Wert ist, umso höher ist die Konzentration der Virenfragmente in der Probe.
Um diesen Zusammenhang in Zahlen fassen zu können, bediente sich das Team um Jared Bullard von der kanadischen University of Manitoba eines Tricks. Sie verwendeten Proben, die zuvor mittels RT-PCR als positiv bewertet worden waren. Diese züchteten sie auf sogenannten Vero-Zellen an. Bei Vero-Zellen handelt es sich um eine Zelllinie, die aus normalen Nierenzellen von Grünen Meerkatzen gewonnen wurde. Darauf ’gedeihen’ Viren besonders gut. Wenn ihre Konzentration in der Probe ausreicht, um infektiös zu sein, vermehren sie sich.
Genau das aber war nur bei 28,9 Prozent der positiven PCR-Proben der Fall. Hinzu kam ein weiterer, ganz entscheidender Faktor: Diese 28,9 Prozent traten nur dann auf, wenn im PCR-Test nicht mehr als 24 Replikationszyklen durchgeführt wurden.
Bei Ct-Werten oberhalb 24 stellten die Forscher keinerlei Vermehrung der Viren mehr fest. Deshalb sei eine Ansteckung oberhalb dieses Wertes nicht zu erwarten, folgerten sie bereits im Mai.
Die Zahlen bergen politischen Sprengstoff, denn Swissmedic und RKI müssen sie gekannt haben.
Gemessen wird jedoch bei Ct-Werten von 30 und mehr. Eine Vorschrift, die den im Mai beobachteten Grenzwert von 24 zugrunde legt, gibt es weder in Deutschland noch in der Schweiz oder in anderen Staaten. Die Folgen sind brisant. Denn die Zahl der immer wieder diskutierten Neuinfektionen sagt praktisch nichts aus und schürt vollkommen grundlos Panik.
Das bestätigen auch PCR-Testlabors, die in Deutschland entsprechende SARS-CoV-2-Untersuchungen durchführen:
«Je höher der Ct-Wert, desto niedriger ist die Viruskonzentration in der untersuchten Probe. Bei der SARS-CoV-2-PCR weisen Ct-Werte größer als 30 auf eine niedrige, Ct-Werte größer als 35 auf eine sehr niedrige Viruskonzentration in der Probe hin.»
Auch in Sachen Ansteckungsrisiko ist das Dokument des Fachlabors präzise. Es deckt sich mit den Ergebnissen der kanadischen Forscher:
«Da mittels PCR nur die virale RNA und nicht das gesamte, intakte Virus detektiert wird, ist ein SARS-CoV-2-RNA-Nachweis nicht automatisch gleichzusetzen mit Infektiosität oder Ansteckungsfähigkeit des Patienten.»
Quelle:
Predicting Infectious Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2 From Diagnostic Samples – 22. Mai 2020
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Die Google-Übersetzung des Anfangs der Originalstudie aus Oxford vom 22.Mai 2020:
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Das Auftreten des schweren Coronavirus 2 mit akutem respiratorischem Syndrom (SARS-CoV-2), dem Erreger der Coronavirus-Krankheit 2019 (COVID-19), stellt einen Notfall für die öffentliche Gesundheit von historischem Ausmaß dar. Die globalen Eindämmungsbemühungen hatten weitreichende gesellschaftliche und wirtschaftliche Auswirkungen. Politische Entscheidungen zur Lockerung der Maßnahmen im Bereich der öffentlichen Gesundheit erfordern ein besseres Verständnis der Dauer der Infektiosität. Diese Informationen wirken sich auch auf die Infektionskontrollpraktiken und die Gesundheit am Arbeitsplatz aus.
Bisher beruhte die Diagnose von COVID-19 auf dem Nachweis von SARS-CoV-2 durch molekularen Nachweis. Während diese Methode sowohl schnell als auch hochempfindlich ist, gibt es wichtige Einschränkungen. Mehrere Studien beschreiben die Persistenz von SARS-CoV-2-RNA an verschiedenen Körperstellen [ 1 , 2 ]. Aus anderen Viren ist bekannt, dass virale RNA über die Infektiosität hinaus bestehen kann [ 3 , 4]. Infolgedessen ist der Nachweis der In-vitro-Infektiosität auf Zelllinien ein aussagekräftigerer Ersatz für die Virusübertragung. Die Fähigkeit der Viruskultur, die Infektiosität zu informieren, ist ein wichtiger Aspekt der Diagnostik, ihre Verwendung wird jedoch durch ihre schwierige und arbeitsintensive Natur behindert. Dies wird durch die Notwendigkeit von Einrichtungen der Biosicherheitsstufe 3 im Fall von SARS-CoV-2 weiter erschwert. In einer kürzlich durchgeführten Kohortenstudie mit 9 Patienten konnte kein Virus mehr als 7 Tage nach Auftreten der Symptome wiederhergestellt werden [ 1]. Diese wichtige Studie ist begrenzt durch die geringe Anzahl untersuchter Patienten und die Tatsache, dass alle 9 Fälle miteinander verbunden sind; Daher können die Daten eine eindeutige virale Subpopulation darstellen. Hier ergänzen wir die vorhandene Literatur, indem wir die Ergebnisse der Viruskultur bei einer größeren Gruppe von Patienten im Querschnitt im Vergleich zu den Daten der Polymerasekettenreaktion (PCR) und dem Zeitpunkt des Symptombeginns präsentieren.
MATERIALEN UND METHODEN
SARS-CoV-2 Reverse-Transcription-PCR-Zyklusschwellenwerte und Symptombeginn zu testen
Alle Proben in dieser Studie wurden zur Unterstützung der routinemäßigen Pflege und Überwachung der Reaktion auf die öffentliche Gesundheit in der kanadischen Provinz Manitoba entnommen. In allen vermuteten COVID-19-Fällen wurde im Cadham Provincial Laboratory (CPL), dem Labor für öffentliche Gesundheit, eine SARS-CoV-2-Reverse-Transkription-PCR (RT-PCR) an nasopharyngealen (NP) oder endotrachealen (ETT) Proben durchgeführt.
Die NP-Tupfer und ETT-Proben in viralen Transportmedien wurden 24–72 Stunden bei 4 ° C gelagert, bis sie mittels Echtzeit-RT-PCR auf einen 122-nt-Teil des Arzneimittels auf das Vorhandensein von SARS-CoV-2-RNA getestet wurden Sarbecovirus-Hüllgen (E-Gen) [ 5 ]. Fünfundfünfzig Mikroliter RNA wurden aus 200 ul einer Atmungsprobe unter Verwendung des Ambion AM1836-RNA-Kits (Thermo Fisher) in Kombination mit dem Kingfisher Flex-Instrument (Thermo Fisher) extrahiert. Die 20 & mgr; l-Reaktionen, bestehend aus TaqMan Fast Virus One-Step-Master-Mix und 5 & mgr; l RNA, wurden 5 Minuten bei 50 ° C, 20 Sekunden bei 95 ° C und anschließend 40 Zyklen von 5 Sekunden bei 95 ° C und 30 Zyklen durchgeführt Sekunden bei 58 ° C auf einem Bio-Rad CFX96-Thermocycler. Die RT-PCR-Ergebnisse wurden mit der CFX Manager-Software (Version 3.1) analysiert.
Durch öffentliche Gesundheit und Epidemiologie / Überwachung sowie Laboraufzeichnungen wurde das Datum des Symptombeginns bestimmt. Die Zeit vom Auftreten der Symptome bis zur RT-PCR oder den Symptomen bis zum Test (STT) wurde anhand von Laboraufzeichnungen berechnet. Für alle positiven Proben wurde die Zyklusschwelle (Ct) erhalten. Die Studie wurde gemäß dem Protokoll HS23906 (H2020: 211) durchgeführt, das vom Ethikausschuss der Universität von Manitoba genehmigt wurde.
Median Tissue Culture Infectious Dose Assay
Die Proben wurden zwischen 2 und 4 Wochen bei –80 ° C gelagert, bevor sie für die Kultur verarbeitet wurden. Die Virustiter der Patientenproben wurden durch Tests der mittleren Gewebekultur-Infektionsdosis (TCID 50 ) in einem Labor der Biosicherheitsstufe 4 bestimmt. Kurz gesagt, Vero-Zellen (ATCC: CCL-81), gehalten in modifiziertem Eagle-Medium (MEM), ergänzt mit 5% fötalem Rinderserum (FBS), 1% Penicillin / Streptomycin, 0,5 μg / ml Amphotericin B und 1% L – Glutamin wurden in Platten mit 96 Vertiefungen (Thermo Scientific, 167008) bei 70% Konfluenz ausgesät. Unter Verwendung von Verdünnungsblöcken wurden Patientenproben in MEM, ergänzt mit 2% FBS, 1% Penicillin / Streptomycin, 0,5 μg / ml Amphotericin B und 1% L, 10-fach von 10 –1 auf 10 –8 seriell verdünnt-Glutamin. Die Vero-Zellen wurden dreifach verdünnt und 96 Stunden bei 37 ° C mit 5% Kohlendioxid inkubiert. Nach einer Inkubation von 4 Tagen wurde die zytopathische Wirkung unter einem Mikroskop bewertet und aufgezeichnet. TCID 50 und TCID 50 / ml wurden unter Verwendung der zuvor beschriebenen Reed- und Muench-Methode berechnet [ 6 ]
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